بررسی ارتباط حذف ها و جهش های نقطه ای ژنوم میتوکندری با اختلالات اسپرمی مردان نابارور

بررسی ارتباط حذف ها و جهش های نقطه ای ژنوم میتوکندری با اختلالات اسپرمی مردان نابارور

فرمت فایل دانلودی: .docx
فرمت فایل اصلی: docx
تعداد صفحات: 90
حجم فایل: 8688 کیلوبایت

 

بررسی ارتباط حذف ها و جهش های نقطه ای ژنوم میتوکندری با اختلالات اسپرمی مردان نابارور

تعداد صفحات : 94 صفحه

 

فهرست مطالب

فهرست اشکال
فهرست جداول
لیست علائم و اختصارات
چکیده فارسی
چکیده انگلیسی
فصل اول( معرفی پژوهش)
1-1- بیان مساله
1-2- اهداف تحقیق
1-3- فرضیات تحقیق
فصل دوم( دانستنیهای پژوهش)
2-1- ناباروری
2-1-1- ناباروری اولیه
2-1-2- ناباروری ثانویه
2-2- علل شایع ناباروری در مردان
2-3- تقسیم بندی کلینیکال وژنتیکی مردان نابارور
2-4- اسپرماتوژنز
2-5- میتوکندری انسان
1-5-1- ساختار میتوکندری انسان
2-5-2- عملکرد میتوکندری
2-5-3- زنجیره انتقال الکترون در میتوکندری
2-5-4- ژنتیک میتوکندری و همانند سازی و رونویسی ژنوم آن
2-5-5- اختلالات و جهشهای ژنوم میتوکندری
2-6- نقش عملکردی میتوکندری در تحرک اسپرم
2-6-2 – حذف ها و جهش های نقطه ای  ژنوم میتوکندری وارتباط آن با تحرک اسپرم
فصل سوم (مواد و روشها)
3-1- فهرست وسایل و مواد مورد نیاز
3-1-1- تجهیزات و دستگاهها
3-1-2- مواد مورد استفاده
3-2- جمع آوری و ویژگیهای نمونه های سمن
3-3- آنالیز میکروسکوپی پارامترهای اسپرمی
3-4- استخراج DNA از اسپرم
3-5- تعیین کیفیت و کمیت DNA استخراج شده
3-5-1- روش اسپکتروفتومتری
3-6- طراحی پرایمرهای اختصاصی برایmtDNA
3-7- واکنش زنجیره ای پلی مراز (PCR)
3-7-1- مواد لازم جهت انجام  PCR
3-7-2- برنامه PCR اختصاصی
3-7-3- برنامه Long PCR
3-7-4- روش Primer shift PCR برای تائید قطعات حذف شده
3-8- روش PCR-RFLP جهت تعیین ژنوتیپ جهشهایA3243G  و A73G
3-9- بارگیری نمونه ها روی ژل الکتروفورز آگارز
3-9-1- تهیه محلول  TAE 10X
3-9-2- طرز تهیه ژل آگارز 1%
3-9-3- الکتروفورز ژل آگارز افقی
3-9-4- لودینگ بافر
3-9-5- مارکرهای اندازه DNA
3-10- تعیین توالی DNA DNA sequencing))
3-11- آنالیز آماری داده ها
فصل چهارم(نتایج پژوهش)
4-1- بررسی جمعیت مراجعه کننده گان و انتخاب نمونه ها
4-2- کیفیت و کمیت DNA استخراج شده از اسپرم
4-3- اختصاصی ژنوم میتوکندریایی  PCRآنالیز
4-3-1- تایید حضورmtDNA  در ژنوم استخراج شده
4-3-2- مطالعه حذف های بزرگ در mtDNA
4-3-3-تائید قطعات حذفی با استفاده از  Primer Shift PCR
4-3-4- توزیع فراوانی حذف های ژنوم میتوکندری در افراد بارور و نابارور
4-3-5- آنالیز جهش های A73G و A3243G در افراد بارور و نابارور
4-3-6- تعیین توالی DNA
فصل پنجم( بحث ونتیجه گیری)
بحث
پیوست ها
پیوست 1-: نمونه فرم پرشسنامه مر بوط به مراجعه کنندگان
منابع

 

چکیده فارسی:

بیان مساله: ناباروری به عدم توانایی بچه دار شدن بعد از حداقل یک سال ازدواج بدون استفاده از وسایل پیشگیری اطلاق می شود. حدود نیمی از عوامل ناباروری مربوط به فاکتورهای مردانه می شود. عوامل ژنتیکی، از جمله فاکتورهای مهم دخیل در ناباروری مردان می باشد. فاکتورهای ژنتیکی موثر در ناباروری مردان می تواند داخل هسته ای یا خارج هسته ای باشند. تعداد زیادی از ژن های هسته ای مثل ژن های MTHFR، پروتامین، رسپتور آریل هیدرو کربن و .... در ناباروری مردان دخیل می باشند. حذف ها و موتاسیون های موجود در ژنوم میتوکندری یکی از مهمترین فاکتورهای خارج هسته ای موثر در ناباروری مردان می باشند. هدف از این مطالعه بررسی ارتباط سه حذف bp4977، bp7345 و bp7599 و دو موتاسیون نقطه ای A73G و A3243G با ناباروری در مردان می باشد.

مواد و روش ها: در یک مطالعه مورد-شاهدی از 60 مرد بارور و 60 مرد نابارور آستنواسپرم مراجعه کننده به مرکز ناباروری بیمارستان شهید بهشتی کاشان نمونه های سمن جمع آوری شد. در مرحله بعد ژنوم اسپرم توسط کیت استخراج ژنوم ایزوله شد. ژنوم میتوکندری برای هر نمونه درناحیه حذف ها، توسط Long PCR تکثیر شد. تایید حذف های مذکور بوسیله روش Primer shift PCR، تایید شد. همچنین ژنوتیپ نمونه ها در نواحی A73G و A3243G بوسیله تکنیک PCR-RFLP تعیین شد و توسط تعیین توالی DNA، تایید شد.

نتایج: داده های ما نشان داد که  درصد حذف های 4977 (p= 0.029) و 7599 (p= 0.001) در گروه مردان نابارور بطور معناداری بالاتر از گروه مردان بارور بود. درحالی که جهش های نقطه ای موجود در ژنوم میتوکندری ارتباطی با ناباروری مردان نداشت.

 

نتیجه گیری: یافته های ما نشان می دهد که حذف های 4977bp و 7599bp ریسک فاکتور مهمی برای ناباروری مردان بخصوص آستنواسپرمی محسوب می شود.

 شناسایی حذف ها و جهش های ژنوم میتوکندری برای فهم بهتر ارتباط ناباروری مردان  با اختلالات ژنتیکی دخیل در آن از اهمیت بالایی برخوردار است.

 

کلمات کلیدی: ناباروری مردان، ژنوم میتوکندری، حذف های  بزرگ میتوکندری، جهش های نقطه ای، PCR-RFLP، Long PCR

 

 

 

 

 

پرداخت با کلیه کارتهای عضو شتاب امکان پذیر است.